正能生物“精品一抗”及“重组兔单抗”系列产品线，目前基本完成全现货覆盖；内参、二抗和标签抗体系列中，热卖靶标及货号现货充足！

    根据市场需求反馈情况，我们会不间断的调整抗体生产量及库存储备。现已基本完成热门靶标的全部现货储备。

    新官网目前已经能够在产品最终界面查看所需产品的详细货期（如图），欢迎广大用户选购~

具体储存建议以产品说明书及产品标签为准。

1.一般情况下,浓缩抗体可以在2-8°C条件下储存12周

2.为延长抗体使用期限,建议客户收到抗体后立即冻存于-20°C冰箱(50%甘油的凝固点为-24°C）

3.长期储存,建议将抗体分装保存在温度设置更低的冰箱中(分裝目的是为了减少反复冻融对抗体活性的损害,同时避免多次从同-管中吸取抗体造成污染)。

      脑组织属于多脂质特殊组织，建议用液氮研磨组织，用强力的蛋白提取液提取蛋白，防止蛋白降解（全程冰上操作，蛋白提取液要预先预冷。不要4℃放置太长时间）。在4℃旋转混合仪上进行充分裂解30min，裂解液要充分离心4℃，15000rpm，30min。小心的避开脂质层，取上清再加足量或者过量的Laemmli buffer，95℃，20min加热变性，如果看不见明显的脂质层，可以将离心时间延长至60min。

      核蛋白和膜蛋白，这类蛋白的内源性表达量大部分较低，需通过专门的提取方式进行富集，然后裂解得到待测样本，这种类型蛋白的提取Kit商业应用已经很成熟，国内可供选择的品牌也很多。

      正能生物会不间断的进行产品应用验证和产品线梳理，下架原因一般有如下情况：

（1）对于某一应用检测不合格的产品，我们将下架该产品的该应用；

（2）对于多个应用的多轮检测仍不合格的产品，我们将直接下架该货号；

（3）通过多轮验证后的产品，出现了反应种属、应用和功能的重复，例如A货号与B货号产品的反应种属和应用完全相同、宿主相同、性能相同，则我们将会择其一进行下架，减少客户选择产品的难度；

（4）某一货号产品销量极少，即将过保时。

    根据经验，想要跑出好看的LC3双条带，最适用的条件是12%的分离胶，以及15孔的梳子进行上样和电泳。

    依据试验，10孔的梳子很难分开LC3的双条带，15%的分离胶浓度可能过高，造成电泳时间变长，有条带弥散的风险。转膜使用正常的0.22μm PVDF，80v，60min即可，转膜液添加20%甲醇，保证小分子蛋白与膜的结合。

    二抗，又名“secondary antibody”,常出现在需要使用一抗的免疫实验中。

    按照功能可分为常规标记二抗和荧光二抗两种。二抗的结合对象为一抗，其以一抗本身 （如兔IgG）为靶标，通常在产品名称中用类似“Goat Anti-Rabbit（即山羊抗兔）”来标识靶标识别关系。以“Goat Anti-Rabbit（即山羊抗兔）”为例，“Goat-山羊”为二抗的抗体来源种属（即“宿主”），“Rabbit-兔”为二抗所要结合的一抗的抗体来源种属。

    当某一免疫反应体系中的一抗来源为“Mouse-小鼠”时，即可选用“Goat Anti-Mouse”或“Rabbit Anti-Mouse”等二抗来完成反应。

    二抗与一抗的抗体来源种属，应保持不同，以避免抗体内自相反应。

“出现杂带”以及“条带位置不符合预期”，这两种情况需要分开讨论：

第一种情况：蛋白转录及翻译后的修饰，该因素是引起杂带的最常见原因。

转录后，由于选择性剪切的作用，同一个转录本会翻译出不同大小的蛋白，这类蛋白称为该蛋白的剪接体。

在UniProt查询蛋白时，可以在“Sequences”部分看到该蛋白已报道过的Isoforms。在进行实验前，需要比对每个剪接体造成的变化是否影响了目标蛋白的对应结构域，进而判断本研究种涉及的蛋白到底应该检测哪条主带，又或者哪几条带。

我们在阅读文献时所看到的WB实验图片中，也偶尔会出现双条带或多条带。这些现象是研究过程中值得解释和讨论的。在进行Western Blot实验时，我们应该清楚，针对某些目标蛋白的检测结果并不一定是只有一条带。

此外，蛋白在翻译完成后，可能会进行各类修饰，引起蛋白大小明显改变的多为糖基化修饰。在一些分泌型蛋白和膜蛋白上，糖基化位点的存在会将一个蛋白的大小增加至两倍或者更多，且由于组织的特异性，同一个蛋白在不同样本中的糖基化修饰差别很大（如下图所示）。

同时，有的蛋白存在前体和成熟体，这种蛋白一般客户在研究时，应该会有所了解，但为了防止信息差，依然需要跟客户解释这个蛋白本身的特性。

 另一种情况比较偶发：在细胞的培养状态不太好或细胞传代过多的情况下，由于基因组的变异，细胞会表达某种蛋白的截短蛋白。这种被截短、剪接后的靶蛋白可能是未经报道，但由于仍存在抗原识别位点（或抗原表位）而被识别出来。一般情况下，可以通过裁膜避免。

 还有一各影响因素，即蛋白等电点。

 蛋白质本身是有电荷的，当处于某一个pH值时，蛋白质电荷会被中和，那么该处的数值我们称为等电点pI。大部分的蛋白质的等电点小于6，所以我们在中性的电泳环境中，蛋白因为等电点小于pH值，因此带负电荷，而电泳是蛋白从负极向正极迁移的过程，带负电的蛋白在电场中，不会受到阻力。但是有的蛋白等电点比较大，大于7甚至接近8，这时，由于电泳条件不足以中和电荷，使得蛋白质带正电，在电场中迁移受到阻力，由此产生蛋白分子量变大的错觉，因此marker仅能作为参考，而实际的主带仍然要结合蛋白特性进行判断。

 样本保存和冻融。反复的冻融，或者蛋白酶抑制剂，磷酸酶抑制剂失效，会造成蛋白质的降解，引起多条带的情况出现，但这种情况一般是以“拖尾”的形式居多。另一种情况，大分子的蛋白本身会发生降解，但是由于观测的条带在比较大的marker附近，降解的较小片段在实际裁膜过程中，基本检测不到。同时，煮沸蛋白的时间不够，冻融后没有煮，会造成蛋白形成同源多聚体的形式，在目的大小两倍，或者多倍的地方出现条带。

    考虑分离胶和浓缩胶的配方是否出现了问题。Tris-HCl这一类的缓冲液，APS促凝剂等等，随着配制时间，保存时间的推移，可能会产生pH值失衡，药物药性失效，导致制备凝胶时出现问题。例如，APS失效会引起凝胶凝固时间变长，正常条件下20分钟以内可以凝固，可能会延长到30到40分钟，这种情况会影响条带分离的成型。

    客户使用380145 - Aurora B Rabbit pAb，得到如下条带：

    经过沟通，更换APS之后，得到优化的结果：

    不同的缓冲体系试用pH的范围，一般是依据蛋白等电点等因素进行适当的选择。